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研究生： 林佳德
論文名稱： 用奈米鑽石和奈米孔徑大小的濾紙做低濃度樣品的預濃縮
Pre-concentration of Dilute Protein Samples using Nanodiamond and Nano Pore Sized Filter Paper
指導教授： 韓肇中
學位類別： 碩士
Master
系所名稱： 化學系
Department of Chemistry
論文出版年： 2007
畢業學年度： 95
語文別： 中文
論文頁數： 58
中文關鍵詞： 奈米鑽石 、濾紙
論文種類： 學術論文
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    • 本實驗的目的在於開發一種新方法來達到樣品的濃縮，並利用此方法所收集到的濃縮樣品，來應用於MALDI或是AP-MALDI這兩種質譜法上。本實驗主要的創新處，在於不同於以往傳統的離心或是萃取這兩種技術。我所使用的方法是加入奈米鑽石，然後利用奈米鑽石會吸附在胜肽或是蛋白質的這種特性，讓體積較大的樣品，譬如說溶液液體體積有0.1~1ml甚至更多，可以讓這些我們要進行質譜分析的樣品，不會因為濃度過低這個問題，而沒有辦法使用質譜法來確定分析物的質荷比。在經過奈米鑽石吸附在分析物的這個步驟後，接著使用負壓過濾法。讓已經被奈米鑽石吸附的分析物經過濾膜，並且留置於濾膜上，接著再用自己開發出來的新技術，來達到使樣品濃縮的目的；只需要一個步驟，就可以讓分析物離開濾膜還可以與基質達到很好的混合。然後只需要把液體吸取出來轉移到MALDI的標靶上，等液體乾燥形成結晶後,就可以直接進行質譜的分析了。

    目錄 摘要-------------------------------------------------------1 Abstract---------------------------------------------------2 Chapter 1 奈米鑽石的介紹------------------------------------3 圖1-1人工合成鑽石的溫度與壓力分布圖------------------------8 圖1-2 人工合成鑽石與天然鑽石的X-RAY繞射圖----------------9 圖1-3 人工合成鑽石的照片-----------------------------------9 圖 1-4 太空中奈米鑽石的放射光譜----------------------------10 圖1-5 細胞和不同濃度的奈米粒子一起培養24hr ---------------10 圖1-6 奈米鑽石在細胞內培養24hr之後的形態------------------11 Chapter 2 質譜法的介紹-------------------------------------13 2-1 質譜儀的發展起源----------------------------------------13 2-2 蛋白質體學---------------------------------------------15 圖2-1 質譜儀的基本元件------------------------------------16 圖2-2氖的同位素(氖20和氖22)-------------------------------17 2-3 MALDI-TOF之背景介紹----------------------------------17 圖2-3 MALDI-TOF分析物離化的示意圖-----------------------19 2-4 AP-MALDI之介紹---------------------------------------24 圖2-4 AP-MALDI離子源示意圖------------------------------25 表一 MALDI基質之結構及其分子量--------------------------26 表二 不同的分析物所適用的基質種類------------------------27 Chapter 3 Dot Blotter的研發與濾膜的修飾--------------------28 圖3-1 Dot Blotter組合起來的照片---------------------------29 圖3-2 Dot Blotter的分解圖----------------------------------29 圖3-3 使用商業化的Dot Blotter在濾紙上所造成的擴散現象------30 圖3-4 蠟在金屬管上的製備----------------------------------31 圖3-5 左邊為幫濾膜加熱的工具，右邊為裝蠟的器皿------------32 表3-1 PVDF材料特性的介紹--------------------------------33 表3-2　PVDF聚合物的介紹---------------------------------33 圖3-6 濾膜的修飾------------------------------------------37 圖3-7 實驗時濾膜的使用圖解--------------------------------38 圖3-8 自製的Dot Blotter------------------------------------39 圖3-9 抽濾過程中產生的氣泡--------------------------------39 圖3-10 趕走第二塊壓克力通道裡液體的示意圖-----------------40 圖3-11 第一塊壓克力孔徑大小的影響--------------------------40 圖3-12 用基質洗出吸附在奈米鑽石上分析物的示意圖------------41 Chapter 4 實驗流程與結果討論--------------------------------42 圖 4-1 1 pmole的Angiotensin I 質譜圖---------------------43 圖 4-2 不同Ang I濃度與相同基質濃度0.5mg/μL的檢量線圖-----44 圖 4-3 不同Ang I濃度與相同基質濃度1.1mg/μL的檢量線圖-----45 圖4-4 Ang 1 10-6M 4-HCCA 1.1mg/μL-----------------------46 圖4-5 Ang 1 5x10-7M 4-HCCA 1.1mg/μL---------------------47 圖4-6 Ang 1 10-7M 4-HCCA 1.1mg/μL-----------------------47 圖4-7 Ang 1 5x10-8M 4-HCCA 1.1mg/μL---------------------48 圖4-8 Ang 1 10-6M的平均值比較圖--------------------------50 圖4-9 10-6M Ang 1---------------------------------------51 圖4-10 10-6M Ang 1--------------------------------------51 圖4-11 10-6M Ang 1--------------------------------------52 Chapter 5 結論-------------------------------------------53 Reference------------------------------------------------55 Appendix-------------------------------------------------58

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