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研究生: 王智偉
Chih-Wei Wang
論文名稱: 利用金奈米材料作為siRNA的保護劑與其在基因傳輸上之應用
Using Gold Nanomaterials as Protection of siRNA and their Application in Gene Delivery
指導教授: 陳家俊
Chen, Chia-Chun
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2006
畢業學年度: 94
語文別: 中文
中文關鍵詞: 金奈米粒子小片段干擾核醣核酸
論文種類: 學術論文
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  • RNA干擾作用是沉靜導致疾病的基因,而達到治療疾病的重要技術之ㄧ,然而因為RNA比DNA還容易被分解,所以如何有效率的將siRNA轉殖到細胞內是RNAi技術的重要關鍵。結合奈米科技與生物技術,許多功能性的奈米材料被用來作為基因傳輸新型的非病毒載體。在此我們發展了一個新穎的方法,藉由結合的金奈米材料-siRNA來保護小片段干擾核醣核酸(siRNA)免受於被分解。
    我們分別合成正電荷金奈米材料(1)3.5nm金奈米粒子藉由包覆一層具有陽離子的thiocholine使粒子表面帶正電荷,及(2)使用CTAB合成金奈米棒。使得EGFP siRNA可以容易的金奈米材料結合。當我們把EGFP siRNA單獨與核苷酵素(RNase)培養會發現siRNA幾乎完全被分解,而結合金奈米粒子的siRNA將會受到保護。進ㄧ步,我們將此結合金奈米粒子的EGFP siRNA餵入含有EGFP的COS7細胞中,發現會產生RNA干擾的機制,造成EGFP基因的沉靜。結論,我們合成正電荷金奈米粒子可用來作為siRNA的保護劑並可應用於siRNA的基因傳輸。

    目錄 總目錄………………………………………………………………….....Ⅰ 中文摘要………………………………………………………………..Ⅲ 英文摘要……..………………………………………….………….......Ⅳ 第一章 緒論……………………………………………………………..1 1-1 引言……………………………………………..………………1 1-2 奈米材料的簡介………………………………..………………2 1-3 奈米材料之合成……………………………………..…………6 1-4 金奈米材料之合成…………………………………..…………8 1-5 基因傳輸系統…………………………………………………12 1-6 RNA Interference……………………………………………...14 第二章 實驗……………………………………………………………17 2-1 研究動機與目的…………………………………………..…..17 2-2 實驗藥品與儀器………………………………………………18 2-2-1 實驗藥品…………………………………………………...18 2-2-2 實驗儀器…………………………………………………...19 2-3 步驟……………………………………………………………20 2-3-1 正電荷金奈米粒子的合成………………………………...20 2-3-2 金奈米棒的合成………………………………………...…21 2-3-3 金奈米材料修飾螢光染劑………………………………...22 2-3-4 金奈米材料結合siRNA……………………………………23 2-3-5 金奈米材料對EGFP siRNA保護的測試…………………24 2-3-6 金奈米材-siRNA結合物抑制細胞中基因的表現………...25 第三章 結果與討論……………………………………………………28 3-1 材料性質之分析………………………………………………….28 3-1-1 正電荷金奈米粒子…………………………………….......28 3-1-2 合成之金奈米棒…………………………………………...30 3-1-3 金奈米材料修飾螢光染劑………………………………...31 3-1-4 siRNA與金奈米材料的結合…………………….…………34 3-2 金奈米材料作為EGFP siRNA保護劑…………………………..37 3-3 奈米材料作為EGFP siRNA的基因載體…………….………….39 3-3-1 培養穩定的EGFP COS7細胞………………….………….39 3-3-2 金奈米材料-EGFP siRNA對EGFP基因表現的抑制…….39 3-3-3 金奈米材料的細胞存活率測試…………………………...43 第四章 結論……………………………………………………………44 第五章 未來展望………………………………………………………45 參考資料………………………………………...……………………...46

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