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| 研究生： |
侯新龍 Hou, Xin-Long |
|---|---|
| 論文名稱： |
水稻α-澱粉水解酵素基因啟動子的選殖及特性分析 Cloning and characterization of the rice α-amylase gene promoters |
| 指導教授： |
童武夫
Tong, Wu-Fu 余淑美 Yu, Shu-Mei |
| 學位類別： |
碩士 Master |
| 系所名稱： |
生命科學系 Department of Life Science |
| 畢業學年度： | 79 |
| 語文別： | 中文 |
| 論文頁數： | 93 |
| 中文關鍵詞： | 澱粉水解酵素啟動 、水稻懸浮培養細胞 、缺糖處理 、訊號勝 鏈 、DNA 序列 、蛋白質分泌 、生物學 |
| 英文關鍵詞： | GEHOMIC DNA LIBRARY, BIOLOGY |
| 論文種類： | 學術論文 |
| 相關次數： | 點閱：174 下載：0 |
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本實驗室巳發現在水稻懸浮培養細胞的培養基中施以缺糖處理, 則細胞中的某些α-
amylase 基因會大量表現, α- amylase 也大量製造及分泌到細細胞外的培養基中。
本論文即嘗試自水稻的genomic DNA library 中篩選出受到缺糖誘導而大量表現的α
- amylase 基因的啟動子及記號勝 鏈的DNA 序列, 進而利用α- lamylase基因的啟
動子及訊號勝 鏈的DNA 序列與GUS 報導基因(reporter gene) 及抗Hygromycin基因
共同構築成為一種GUS 表現載體, 並將這轉殖到水稻懸浮培養細胞中, 以瞭解在α-
amylase 基因的動子控制下, GUS 表現載體在細胞內的表現情形。
本論文實驗已自水稻genomic DNA library中篩選得到12個不同的α- amylase genom
ic DNA clones, 更進一步確定至少有4 個clones包含有α- amylase基因的5'端及訊
號勝踽鏈的DNA 序列, 這4 個clones 分別是RAMYG6,RAMYG8,RAMYG17及 RAMYG28。其
中 RAMYG6, RAMYG17及 RAMYG28是受缺糖誘導而大量表現的基因。因此將RAMYG6,RAM
YG17及RAMYG28等三個clones的α- amylase基因的啟動子及訊號勝 鏈的DNA 序列與
GUS 基因及抗Hygromycin 基因接合在一起, 構築成一種GUS 表現載體, 結果獲得在R
AMYG17的啟動子控制下的GUS 表現載體為pHE 132, pAE 132及pSE 132。在RAMYG28的
啟動子控制下的GUS 表現載體為RAMYG28-132(I)及RAMYG28-132(II)。在RAMYG6 的啟
動子控制下的GUS 表現載體為RAMYG6-132。
利用electroporation 的方法將pHE 132, pAE 132及RAMYG6-132分別轉殖到水稻懸浮
培養細胞中, 已經證明這三種GUS 表現載體在細胞內均能正常表現。基於以上實驗結
果, 可利用α- amylase 基因的啟動子及訊號勝 鏈引導蛋白質分泌的特性, 從事基
因調控與蛋白質分泌機制的研究。
