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研究生： 陳怡秀
Yi-Hsiu Chen
論文名稱： 非水相毛細管電泳／77K低溫螢光光譜分析法對逆轉醇Resveratrol之分析研究
On-line Identification of Resveratrol by Nonaqueous Capillary Electrophoresis/Fluorescence spectroscopy at 77K
指導教授： 林震煌
Lin, Cheng-Huang
學位類別： 碩士
Master
系所名稱： 化學系
Department of Chemistry
論文出版年： 2001
畢業學年度： 89
語文別： 中文
論文頁數： 124
中文關鍵詞： 非水相毛細管電泳 、77K螢光偵測法 、trans-及cis-逆轉醇
英文關鍵詞： nonaqueous capillary electrophoresis, 77K fluorescence spectroscopy, trans- and cis-resveratrol
論文種類： 學術論文
相關次數： 點閱：198  下載：0 
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    • " Resveratrol "（3,5,4’-trihydroxystilbene）是一種黃酮類的抗氧化物，存在於許多的天然花果中，尤其以葡萄及紅酒中含量最多。它具有抗氧化的功能，可以有效防止人體機能老化、動脈粥狀硬化、心血管病變以及癌症的發生。市售的葡萄酒中內含的resveratrol有trans-及cis-兩種幾何異構物的存在，雖然所含的cis-resveratrol含量很少，但由於目前我們對cis-resveratrol相關的生物藥理活性仍不甚瞭解，因此有必要將此二種異構物分離。目前最常見的分離方法以HPLC為主，並輔以photodiode array來進行偵測及鑑定。但一般市售組裝的儀器大多只能量得室溫吸收光譜，而在室溫下吸收光譜譜峰又相當寬廣，若在複雜的基質中，難免混雜有相似吸收光譜的物質，造成譜峰判定上的困難。
    為了能快速分離且正確判知resveratrol的異構物，本研究開發非水相毛細管電泳層析/超低溫螢光分析法，先以毛細管電泳法分離trans-及cis-resveratrol，當樣品電泳至偵測窗的瞬間冷凍至77 K，以便得到低溫螢光光譜，做為譜峰的確認及更精確的光譜比對。本研究更發現，非水相螢光偵測法比一般使用的水相緩衝溶液在進行分離時，可增強分析物的螢光強度並增加偵測的靈敏度。由實驗結果顯示，使用最佳化的分離條件50 mM SC（Sodium cholate），20 mM醋酸銨（Ammonium acetate），70%甲醇（Methanol），30%氰甲烷（Acetonitrile）的非水相緩衝溶液以及超低溫（77K）螢光法的量測，對於偵測極限有很大的助益，可提高大約150倍。應用於葡萄酒中，可偵測到trans-resveratrol約3.8 ppm的含量。
    本研究還開發了零度（0 ℃）以下（subzero）的非水相毛細管電泳分離方式—冰溫分離法，將全長1/3的毛細管至於零下70度的乾冰槽中進行分離。實驗結果顯示，在低溫下分離不僅可增強分析物的螢光強度，相對於一般在室溫下進行的分離更可以提高電泳分離的解析度。結合冰溫分離及on-line螢光77 K光譜偵測法，不僅可以成功地將resveratrol異構物完全分離，更可以獲知個別異構物的77 K螢光光譜。輔以stilbene異構物的標準螢光光譜比對，更可以進一步確認本實驗量得resveratrol螢光光譜的正確性。

    This work presents a novel method for the accurate determining trans- and cis-resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) by nonaqueous capillary electrophoresis/fluorescence spectroscopy at 77 K. The proposed method permits, not only the separation of resveratrol isomers, but also ensures that on-line spectra are readily distinguishable and unambiguously assigned. The experimental results also indicate that the effect of nonaqueous CE buffer and low-temperature technique increase the detection limit by more than 150-fold.

    論文摘要 Ⅰ 目錄 Ⅲ 圖目錄 Ⅴ 表目錄 Ⅶ 第一章 1 1-1 分析物簡介 1 1-1.1 Resveratrol結構 2 1-1.2 解開紅酒抗癌之迷 3 1-1.3 增強紅酒的抗氧化力 4 1-1.4 那一地區出產的紅葡萄酒對心臟最好？ 4 1-2 研究目的 6 第二章 9 2-1 毛細管電泳層析法的發展史 9 2-2 毛細管電泳層析法的分離原理 14 2-2.1 電泳的分離與遷移率 14 2-2.2 zeta電位與電滲流 15 2-2.3 電分散作用 22 2-2.4 分離效率及解析度 24 2-3 毛細管電泳層析法的分離模式 25 2-3.1 毛細管區帶電泳層析法（CZE） 25 2-3.2 微胞電動毛細管層析法（MEKC） 26 2-4 非水相毛細管電泳層析法 29 2-5 77 K低溫螢光光譜分析法 32 第三章 37 3-1 使用的儀器及週邊設備 37 3-2 自組式毛細管電泳螢光分析儀 40 3-3 自組式螢光光譜儀 43 3-4 毛細管電泳/低溫（77 K）螢光偵測系統 45 3-5 冰溫分離系統 50 3-6 毛細管電泳冰溫分離/低溫（77 K）螢光光譜分析儀 53 3-7 藥品 55 第四章 59 4-1 吸收光譜偵測法鑑定trans-及cis-resveratrol 59 4-2 毛細管電泳/低溫（77 K）螢光偵測法鑑定trans-及cis-resveratrol 63 4-2.1 室溫及77 K的trans- resveratrol螢光光譜性質 63 4-2.2 毛細管電泳/螢光偵測法進行trans-及cis-resveratrol的分離 66 4-2.3 低溫on-line光譜鑑定trans-及cis-resveratrol 70 4-2.4 非水相緩衝液對毛細管電泳分離的影響 73 4-2.4.1 非水相緩衝液的探討 73 4-2.4.1.1 非水相緩衝液電滲流（mEOF）的測量 73 4-2.4.1.2 緩衝液黏度的測量 74 4-2.4.1.2.1 非水相緩衝液黏度的測定 75 4-2.4.1.2.2 水相緩衝液黏度的測定 76 4-2.4.1.3 非水相緩衝液介電常數的探討 77 4-2.4.1.4 非水相緩衝液pH*的探討 80 4-2.4.1.5 SC的特性 81 4-2.4.1.6 非水相緩衝液CMC的探討 84 4-2.4.1.6.1 緩衝液CMC的測量 85 4-2.4.1.6.2 CMC對trans-及cis-resveratrol分離的影響 87 4-2.4.2 非水相緩衝液對trans-resveratrol螢光強度的影響 89 4-2.4.3 非水相緩衝液對trans-resveratrol分離效率的影響 90 4-2.5 低溫效應對trans-resveratrol螢光強度的影響 90 4-2.6 trans-resveratrol偵測極限的測量 93 4-3 葡萄酒中trans-resveratrol的定量實驗 95 4-3.1 葡萄酒的萃取流程 95 4-3.2 葡萄酒中trans-resveratrol的電泳分離 98 4-3.3 類酒中trans-resveratrol回收率的實驗 100 4-3.4 葡萄酒中trans-resveratrol的定量 102 第五章 103 5-1 毛細管電泳／冰溫實驗 105 5-2 Resveratrol異構物冰溫分離／on-line 77 K螢光偵測法 109 第六章 113 發表論文 115 參考資料 117

    參 考 資 料
    1. Jang, M.; Cai, L.; Udeani, G. O.; Slowing, K. V.; Thomas, C. F.; Beecher, C. W.W.; Fong, H. H. S.; Farnsworth, N. R.; Kinghorn, A. D.; Mehta, R. G.; Moon, R. C.; Pezzuto, J. M. Science 1997, 275, 218-220.
    2. Creasy, L.L.; Coffee, J.J. J. Am. Soc. Hortic. Sci. 1988, 113, 230-234.
    3. Celotti, E.; Ferrarini, R.; Zironi, R.; Conte, L. S. J. Chromatogr. A. 1996, 730, 47-52.
    4. Jeandet, P.; Bessis, R.; Gantheron, B. Am. J. Enol. Vitic. 1991, 42, 41-46.
    5. Siemann, E. H.; Creasy, L.L. Am. J. Enol. Vitic. 1992, 43, 49-52.
    6. Soleas, G. J.; Diamandis, E. P.; Goldberg, D. M. Clinical Biochemistry 1997, 30, 91-113.
    7. Sporn, M. B.; Newton, D. L. Fed. Proc. 1979, 38, 2528-2534.
    8. Kopp, P. European J. Endocrinology 1998, 138, 619-620.
    9. Chanvitayapongs, S.; Draczynska-Lusiak, B.; Sun, A. Y. Neuroreport 1997, 8, 1499-1502.
    10. Belguendouz, L.; Fremont, L.; Gozzelino, M. T. Biochemical Pharmacology 1998, 55, 811-816.
    11. Berzas Nevado, J. J.; Contento Salcedo, A. M.; Castañeda Peñalvo, G. Analyst 1999, 124, 61-66.
    12. Cantos, E.; García-Viguera, C.; Pascual-Teresa, S.; Tomás-Barberán, F. A. J. Agri. Food Chem. 2000, 48, 4606-4612.
    13. Trela, B. C.; Waterhouse, A. L. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 1253-1257.
    14. Vastano, B. C.; Chen, Y.; Zhu, N.; Ho, C.; Zhou, Z.; Rosen, R.T. J. Agric. Food Chem. 2000, 48, 253-256.
    15. Juan, M. E.; Lamuela-Raventós, R. M.; Torre-Boronat, M. C.; Planas, J. M. Anal. Chem. 1999, 71, 747-750.
    16. Blache, D.; Rustan, I.; Durand, P.; Lesgards, G.; Loreau, N. J. Chromatogr. B. 1997, 702, 103-110.
    17. Barlass, R.; Miller, M.; Douglas, T. J. Am. J. Enol. Vitic. 1987, 38, 65-68.
    18. Gu, X.; Creasy, L. L.; Kester, A.; Zeece, M. G. J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 3223-3227.
    19. Cartoni, G.; Coccioli, F.; Jasionowska, R. J. Chromatogr. A. 1995, 709, 209-214.
    20. Gu, X.; Chu, Q.; O’Dwyer, M.; Zeece, M. J. Chromatogr. A. 2000, 881, 471-481.
    21. Lu, W.; Poon, G. K.; Carmichael, P. L.; Cole, R. B.; Anal. Chem. 1996, 68, 668-674.
    22. Qzaki, H.; Itou, N.; Terabe, S.; Takada, T.; Sakairi, M.; Koizumi, H. J. Chromatogr. A. 1995, 716, 69-79.
    23. Cai, J.; Henion, J. J. Anal. Toxicol. 1996, 20, 27-37.
    24. Locke, S. J.; Thibault, P. Anal. Chem. 1994, 66, 3436-3446.
    25. Cai, J.; Henion, J. J. Chromatogr. A. 1995, 703, 667-692.
    26. Olson, D. L.; Lacey, M. E.; Sweedler, J. V. Anal. Chem. 1998, 70, 645-650.
    27. Kohlrausch, F.; Wiedemanns Ann. Phys. Chem., 1897, 62, 209-239.
    28. Knox, J. Chromatographia 1988, 26, 329.
    29. Tiselius, A. Trans. Faraday. Soc. 1997, 33, 524.
    30. Hjerten, S. Chromatogr. Rev., 1967, 9, 122-239.
    31. Virtanen, R. Acta Polytechnica Scand., 1979, 123, 1-67.
    32. Joegenson, J. W.; Lukacs, K. D. J. Chromatogr., 1981, 218, 209-216.
    33. Joegenson, J. W.; Lukacs, K. D. Anal. Chem., 1981, 53, 1298-1302.
    34. Rose, D. J.; Jorgenson, J. W. Anal. Chem., 1988, 60, 642.
    35. Otsuka, S. K.; Ichikawa, K.; Tsuchiya, A.; Ando, T. Anal. Chem., 1984, 56, 111.
    36. Terabe, S.; Otsuka, K.; Ando, T. Anal. Chem., 1985, 57, 834.
    37. Row, K. H.; Griest, W. H.; Maskarienc, M. P. J.Chromatogr., 1987, 409, 193.
    38. Hjerten, S.; Zhu, M. D. J.Chromatogr., 1985, 346, 265.
    39. Hjertén, S.; Liao, J. L.; Yao, K. J. Chromatogr., 1987, 387, 127.
    40. Cohen , A.; Karger, B. L. J. Chromatogr., 1987, 397, 409.
    41. Huang, X.; Zare, R. N. Anal. Chem., 1991, 63, 2193.
    42. Huang, X.; Gordon, M. J.; Zare, R. N. Anal. Chem., 1988, 60, 375.
    43. Holland, R. D.; Sepaniak, M. J. Anal. Chem., 1993, 65, 1140.
    44. Kennedy, R. T.; Jorgenson, J. W. Anal. Chem., 1989, 61, 1128.
    45. Yan, C. Y.; Dadoo, R.; Zare, R. N.; Rakestraw, D. J.; Anex, D. S. Anal. Chem., 1996, 68, 2726.
    46. Dittmann, M. M.; Rozing, G. P. J. Chromatogr. A. 1996, 744, 63.
    47. Foret, F.; Krivankova, L.; Bocek, P. Capillary Zone Electrophoresis P8VCH, Weiheim, 1993.
    48. Helmholtz, H. Z. Anal. Phys. Chem., 1897, 7, 337.
    49. Dr. David N. Heiger High Performance Capillary Electrophoresis - An Introduction, 1992, 2nd edition.
    50. David N. Heiger, 《高效毛細管電泳導論》（中譯本），第32頁，1993.
    51. Shibata, K.; Iwata, S.; Nakamura, M. Acta. PhytoChimica. 1923, 1, 105.
    52. Krattiger, B.; Bruin, G. J. M.; Bruin, A. E. Anal. Chem. 1994, 66, 1.
    53. Stefansson, M.; Novotny, M. Anal. Chem. 1994, 66, 1134.
    54. Kim, Y.; Morris, M. D. Anal. Chem. 1994, 66, 1168.
    55. Zhao, Z.; Malik, A.; Lee, M. L. Anal. Chem. 1994, 65, 2747.
    56. Hayek, M. J. Phys. Colloid. Chem. 1951, 55, 1527-1533.
    57. Tuckerman, M. M.; Strain, H. H. Anal. Chem. 1960, 32, 695-698.
    58. Parekh, N. J.; Fatmi, A. A.; Tshabalala, M. A.; Rodgers, B. L. J. Chromatogr. 1984, 314, 65-82.
    59. Fujiwara, S.; Honda, S. Anal. Chem. 1987, 59, 487-490.
    60. Tomlinson, A. J.; Benson, L. M.; Landers, J. P.; Scanlan, G. F.; Fang, J.; Gorrod, J. W.; Naylor, S. J. J. Chromatogr. 1993, 652, 417-426.
    61. Tomlinson, A. J.; Tomlinson, A. J.; Reid, J. M.; Walker, D. L.; Ames, M. M.; Naylor, S. J. High Resolut. Chromatogr. 1993, 16, 324-326.
    62. Tomlinson, A. J.; Tomlinson, A. J.; Naylor, S. J. High Resolut. Chromatogr. 1994, 176, 175-177.
    63. Walbroehl, Y.; Jorgenson, J. W. J. Chromatogr. 1984, 315, 135-143.
    64. Carabias-Martý´nez, R.; Rodrý´guez-Gonzalo, E.; Domý´nguez-Alvarez, J.; Herna´ ndez-Me´ ndez, J. Anal. Chem. 1997, 69, 4437-4444.
    65. Ward, V. L.; Khaledi, M. G. J. Chromatogr. A. 1999, 859, 203-219.
    66. Gallaher, D. L.; Johnson, M. E. Anal. Chem. 2000, 72, 2080-2086.
    67. Wang, F.; Khaledi, M. G. Anal. Chem. 1996, 68, 3460-3467.
    68. Wang, F.; Khaledi, M. G. J. Chromatogr. A. 1998, 817, 121-128.
    69. Wang, F.; Khaledi, M. G. J. Chromatogr. A. 2000, 875, 277-293.
    70. Ward, V. L.; Khaledi, M. G. J. Chromatogr. B. 1998, 718, 15-22.
    71. Tomlinson, A. J.; Benson, L. M.; Naylor, S. LC-GC 1995, 8, 210-216.
    72. Lu, W.; Poon, G. K.; Carmichael, P. L.; Cole, R. B. Anal. Chem. 1996, 68, 668-674.
    73. Shpol’skii, E. V. ; Il’ina, A. A. ; Klimova, L. A. Dokl. Akad. Nauk SSSR 1952, 87, 935.
    74. Winefordner, J. D. Shpol’skii spectroscopy and other site-selection methods Chemical Analysis 2000, 156, 235-272.
    75. Nakhimovsky, L. A.; Lamotte, M.; Joussot-Dubien, J. Handbook of tamperature electronic spectra of polycyclic aromatic hydrocarbons 1989.
    76. Lin, C. -H.; Chung, Y. -L.; Chen, Y-H. Analyst 2001, 126, 302-305.
    77. Phipps, A. M.; Hume, D. N. J. Chem. Educ. 1968, 45, 664.
    78. Nishi, H. J. Chromatogr. A. 1996, 735, 57–76.
    79. Jaffè, H. H.; Orchin M., Theory and Applications of Ultraviolet Spectroscopy, Wiely, New York, 1962, 243-286.
    80. Atkins, P. W. in: Physical Chemistry, 4th ed., W. H. Freeman, New York, 1990, Ch. 24.
    81. Burgi, D. S.; Salomon, K.; Chien, R. L. J. Liq. Chromatogr. 1991, 14, 847-867.
    82. 黃定加 物理化學實驗 高立圖書有限公司1985, 109-130.
    83. Riekkola, M. L.; Wiedmer, S. K.; Valkó, I. E.; Sirén, H. J. Chromatogr. A. 1997, 792, 13-35.
    84. Otsuka, K.; Terabe, S. J. Chromatogr. A. 2000, 875, 163-178.
    85. Sirén, H.; Hiissa, T.; Min, Y. Analyst 2000, 125, 1561-1568.
    86. Nishi, H. J. Chromatogr. A. 1996, 735, 57-76.
    87. Navas Díaz, A.; García Sánchez, F.; García Pareja, A. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 1998, 142, 27-34.
    88. Cifuentes, A.; Bernal, J. L.; Diez-Masa, J. C. Anal. Chem. 1997, 69, 4271-4274.
    89. Pyell, U.; Bütehorn, U. Chromatographia 1995, 40, Janurary.
    90. Ma, S.; Kálmán, F.; Kálmán, A.; Thunecke, F.; Horváth, C. J. Chromatogr. A. 1995, 716, 167-182.
    91. Park, C. M. Ann. NY Acad. Sci. 1973, 209, 237.
    92. Perrella, M.; Heyda, A.; Mosca, A.; Rossi-Bernardi, L. Anal. Biochem. 1978, 88, 212.
    93. Komuro, T.; Yomota, C.; Isaka, H.; Chem. Pharm. Bull. 1988, 36, 1218.
    94. Ma, S.; Horváth, Cs. Electrophoresis 1997, 18, 873.
    95. Ma, S.; Horváth, Cs. J. Chromatogr. A. 1998, 825, 55-69.
    96. James, D. L.; Gustafson, T. L. J. Molecular Structure 1996, 379, 109-120.
    97. Baderschneider, B.; Winterhalter, P. Agric. Food Chem. 2000, 48, 2681-2686.

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