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| 研究生： |
周淑娥 ZHOU, SHU-E |
|---|---|
| 論文名稱： |
穿梭載體選殖於酵母菌內之表現和穩定性 |
| 指導教授： |
周德源
Zhou, De-Yuan |
| 學位類別： |
碩士 Master |
| 系所名稱： |
生命科學系 Department of Life Science |
| 畢業學年度： | 76 |
| 語文別： | 中文 |
| 論文頁數： | 52 |
| 中文關鍵詞： | 穿梭載體 、酵母菌 、複製源 、營養需求基因 、出芽酵母 、裂殖酵母 |
| 英文關鍵詞： | REPLICATION-ORIGIN, AUXOTROPHIC-GENE, GAPOH, SACCHAROMYCES-CEREVISIAE, SCHIZOSACCHAROMYCES-POMBE |
| 論文種類： | 學術論文 |
| 相關次數： | 點閱：160 下載：0 |
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一般用於酵母菌基因選殖的穿梭載體，包含酵母的複製源（replication origin）如
2u，ars ，和用作篩選標誌的營養需求基因（auxotrophic gene）如leu ，trp ，與
大腸菌的質體如pBR322。本實驗利用GAPDH (glyceraldehye) 3-phosphate dehydrog
enase)基因的啟動子接上HBsAB 基因構築成表現重組體pGAPL15, pGAPL25和pTYC11。
將這些重組質體選殖於酵母菌內，藉助HBsAB 來分析它們表現的能力及穩定性。
pGAPL15 和pGAPL25 轉形至Saccharomyces cerevisiae及Schizosccharomyces pombe
，而pTYC11則轉形至Saccharomyces cerevisiae。
經Radioimmunoassay (RIA)測試結果以pTHG11/YNN 27 表現力最佳。質體穩定度與套
數測試結果，仍以pTHG11/YNN 27 最穩定，顯示pTHG11比pGAPL15, pGAPL25更適於選
殖於酵母菌內。對酵母菌而言，pYE8是一種很理想的穿梭質體。
當pGAPL15和pGAPL25送入出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）與裂殖酵母（Schi
zosaccharomyces pombe ），發現在裂殖酵母中表現HBsAg ，產量不高，即酵母菌的
生殖方式，對於HBsAg 基因的表現，沒有直接影響。
對酵母菌所產生的HBsAg 加以萃取、純化，得到在CsCl density gradient 的浮力密
度為1.2gcm-3而在sucrose gradient則為1.06g cm-3聚集成顆粒狀，經過SDS PAGE銀
染分析結果，其分子量約為25Kd，用電子顯微鏡來檢視HBsAg 顆粒大小約為22 nm。
