Author: |
何建樂 HE,JIAN-LE |
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Thesis Title: |
猿猴病毒40型大T 抗原對老鼠漿細胞和脾臟B 淋巴球抗體分泌的影響 |
Advisor: |
曾哲明
Tseng, Jer-Ming |
Degree: |
碩士 Master |
Department: |
生命科學系 Department of Life Science |
Academic Year: | 79 |
Language: | 中文 |
Number of pages: | 62 |
Keywords (in Chinese): | 猿猴病毒 、老鼠漿細胞瘤細胞 、脾臟B 淋巴球抗體 、核融合 、融合瘤 、免疫球蛋白 |
Keywords (in English): | COHDITIONAL MEDIUM |
Thesis Type: | Academic thesis/ dissertation |
Reference times: | Clicks: 160 Downloads: 0 |
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建立一能分泌單一特殊抗體之B 淋巴球細胞株, 是研究抗體構造及功能中最重要事情
。目前用來製造B 淋巴球細胞株的方法中; 不管是用礦物油人為誘發產生之漿細胞瘤
或是用核融合所產生之副合瘤皆有其缺點。漿細胞瘤之遣傅性質不穩定, 且易造成所
產生之免疫球蛋白構造上的變異; 而融合瘤又容易造成染色體上的流失。基於以上之
缺點, 我們希望利用病毒之致癌基因來建立B 淋巴球細胞株。大T 抗原為猿猴病毒40
型早期基因區之產生, 目前已經知道只要有大T 抗原的穩定表現便足以造成寄主細胞
之轉型, 而使其變成一能不斷分裂生長之轉形細胞株。所以本論文之主要目的便希望
能借助猿猴病毒40型內大T 抗原之致癌基因的幫助, 而能成功地轉形老鼠脾臟B 淋巴
球, 使其成為一能不斷分裂且不斷產生單一特殊抗體之B 淋巴球細胞株。本論文分成
兩部分成兩部分, 在第一部分實驗中, 利用帶有大T 抗原基因之兩種質體(pSC和pSV1
) 轉形一能分泌IgA 抗體之MOPC-315漿細胞瘤, 以評估進入細胞內之大T 抗原是否會
影響細胞之生長及抗體之分泌。在第二部分實驗中, 便直接以帶有大T 抗原基因之兩
質體去轉形老鼠脾臟B 淋巴球, 而評估用大T 抗原轉形誘發產生B 淋巴球細胞株之可
行性。由實驗之初步結果證實: 經大T 抗原基因轉形過之MOPC-315細胞株, 其生長狀
錶和抗體分泌情形不受影響。隨後我們拿大T 抗原基因之質體轉形老鼠脾臟B 淋巴球
, 發現大T 抗原能成功地的轉形老鼠脾臟B 淋巴球且能不斷分泌IgM(μ、λ) 、IgG
(r 、λ)、IgA (a 、λ)抗體長達一個月時間。由此實驗之結果推論: (1) 、將pS
C 和pSV1兩質體做共同轉形所造成之效果, 較只有單一質體之效果好。(2) 、在T 淋
巴球conditional medium中具有轉形細胞生長所需之生長因子。(3) 、轉形細胞無法
穩定生長除了TCM 不足所造成外, 也可能因大T 抗原基因沒有穩定嵌入寄主細胞之染
色體上, 或是大T 抗原表現不穩定所造成。(4) 、在病毒轉形之實驗中, 經常會有轉
形一段時間後, 轉形細胞變大而死亡之現象發生。